ائوزین (Eosin) چیست؟
ائوزین (Eosin) نام چندین ترکیب اسیدی فلورسنت است که نمک‌هایی با ترکیبات بازی یا ائوزینوفیلیک مانند پروتئین‌های حاوی اسیدهای آمینه به آن‌ها متصل می‌شوند، تشکیل می‌شوند.
مانند آرژنین و لیزین، و در نتیجه اقدامات برم بر روی فلورسئین، آن‌ها را به رنگ قرمز تیره یا صورتی لکه‌دار می‌کند.رنگ Eosin YS یک نمک سدیم آلی است که 2 ‘، 4’، 5 ‘، 7’-تترابروموفلورسئین است که در آن گروه کربوکسی و گروه هیدروکسی فنلی از پروتئین خارج شده و بار ناشی از آن توسط دو یون سدیم خنثی می‌شود. این ماده به عنوان یک فلوئوروکروم و یک رنگ بافت شناسی نقش دارد. این یک ترکیب ارگانوبرومین و یک نمک سدیم آلی است.
علاوه بر رنگ‌آمیزی پروتئین‌ها در سیتوپلاسم، می‌توان از آن برای لکه‌گیری کلاژن و فیبرهای عضلانی برای معاینه در زیر میکروسکوپ استفاده کرد. سازه‌هایی که به راحتی با ائوزین لکه‌دار می‌شوند، ائوزینوفیل نامیده می‌شوند. در واقع دو ترکیب بسیار نزدیک وجود دارد که معمولاً به عنوان Eosin شناخته می‌شوند.در زمینه بافت‌شناسی، ائوزیـن Y (یک مشتق تتابرومو از فلورسئین است) شکلی از ائوزیـن است که بیشتر به عنوان لکه بافت‌شناسی مورد استفاده قرار می‌گیرد.
از ائوزین به عنوان ضد لک استفاده می‌شود که باعث رنگ آمیزی گل رز سیتوپلاسم می‌شود. شدت ائوزین انتخاب فردی است. بیشترین کاربرد ائوزین “ائوزین Y” است. “Y” مخفف yellowish است. این ماده به دو صورت محلول در آب یا محلول در الکل موجود است. اکثر آزمایشگاه‌ها از فرم محلول در آب ائوزین Y در محلول آب – الکل استفاده می‌کنند.
روش تولید ائوزین
در یک فلاسک ته گردی 200 میلی لیتری مجهز به همزن مکانیکی، دماسنج و قیف افزودنی، 100 میلی لیتر اتانول و 16.6 گرم (0.05 مول) فلورسئین خالص قرار داده شد.با هم زدن مداوم 36 گرم (0.45 مول) برم اضافه شد. در طی افزودن، گرما افزایش یافته و باید واکنش کنترل شود تا دما از 40 درجه سانتیگراد تجاوز نکند. پس از ورود نیمی از رسوب برم فلورسئین ناپدید می‌شود، زیرا دی‌برم فلورسین به راحتی در الکل حل می‌شود.
در طی افزودن بیشتر برم، به تدریج بلورهای 3،4،5،6-تترابرومو فلوروسین (ائوزین) به دست آمد. برای تکمیل واکنش پس از افزودن برم، مخلوط به مدت 15 دقیقه دیگر هم زده و سپس اجازه داده شد برای یک روز متبلور شود.
بلورهای جدا شده روی یک قیف بوخنر فیلتر شده و با 20 میلی لیتر الکل شسته می‌شوند. ائوزین کریستال حاوی 1 قسمت الکل است. برای از بین بردن الکل، ائوزین در دمای 110 درجه سانتیگراد خشک می‌شود. بازده آزمایش30 گرم (92٪ تئوری).
هماتوکسیلین و ائوزین
برای معاینه معمول، هماتوکسیلین و ائوزین (H&E) دارای رنگ آمیزی انتخابی است. این لکه ساختارهای مختلف بافتی را ایجاد می‌کند، که در غیر این صورت شفاف هستند، بنابراین شما می‌توانید نمای کاملی از بافت را بدست آورید.
همانطور که از نام آن مشخص است، لکه H&E از ترکیب دو رنگ – هماتوکسیلین و ائوزین استفاده می‌کند. این دو لکه به ترتیب توسط بامر و فیشر به ترتیب در سالهای 1865 و 1875 به طور مستقل معرفی شدند. در سال 1876، ویسوزکی استفاده از آن‌ها را به عنوان یک روش رنگ آمیزی بافت برای رنگ آمیزی مواد مختلف با رنگ‌های مختلف توصیف کرد.
علیرغم سادگی، این لکه امتحان زمان را تحمل کرده است. حتی اکنون، با گذشت بیش از یک قرن، H&E همچنان پرکاربردترین رنگ آمیزی بافتی در سراسر جهان است.
علم پشت H&E
رنگ آمیزی به طور تصادفی رنگ ایجاد نمی‌کند. در عوض، رنگ‌ها از اختلافات شیمیایی بافت برای رنگ آمیزی متفاوت اجزای مختلف بهره می‌برند.
پیوند یونی مهمترین نوع اتصال است که در روش‌های رنگ آمیزی بافت شناسی رخ می‌دهد. این شامل جاذبه الکترواستاتیک بین یون‌های با بار مخالف است که یکی از آن‌ها در بافت ثابت می‌شود و دیگری آن در رنگ است.
هماتوکسیلین به تنهایی از نظر فنی یک ماده رنگی نیست و به طور مستقیم باعث رنگ آمیزی بافت‌ها نمی‌شود. بنابراین لازم است که در ترکیب با “mordant” – (تثبیت کننده) ترکیبی که به آن کمک می‌کند تا به بافت پیوند یابد، استفاده شود. ماده مورد استفاده معمولاً یک کاتیون فلزی مانند آلومینیوم است. هماتوکسیلین در ترکیب با نمک‌های آلومینیوم کاتیونی است و به عنوان یک رنگ اساسی عمل می‌کند. بار مثبت دارد و می‌تواند با اجزای سلول بازوفیل دارای بار منفی مانند اسیدهای نوکلئیک در هسته واکنش دهد. در نتیجه اینها رنگ آبی دارند.
ائوزین آنیونی است و به عنوان یک رنگ اسیدی عمل می‌کند. این بار منفی است و می‌تواند با اجزای اسیدوفیل دارای بار مثبت در بافت مانند گروه‌های آمینه موجود در پروتئین‌ها در سیتوپلاسم واکنش نشان دهد. در نتیجه اینها رنگ صورتی می‌گیرند. H&E یک ترکیب رنگ آمیزی مفید همه کاره است که همچنین سریع و آسان استفاده می‌شود، که ممکن است دلیل مقاومت در برابر آزمون گذشت زمان را توضیح دهد.
موارد استفاده از ائوزین:
استفاده در تاریخ‌شناسی:
نمونه‌ای از تراشه با رنگ هماتوکسیلین و ائوزین
این ماده بیشتر در رنگ‌آمیزی H&E (هماتوکسلین و Eosin) به عنوان میزبان هماتوکسیلین استفاده می‌شود. رنگ‌آمیزی H&E یکی از رایج‌ترین تکنیک‌های تاریخ‌شناسی است. بافت آغشته به هماتوکسلین و Eosin، سیتوپلاسم آغشته به رنگ صورتی-نارنجی و هسته‌های تیره، آبی یا بنفش را نشان می‌دهد. همچنین گلبول‌های قرمز خون را به شدت قرمز می‌کند.
برای رنگ‌آمیزی، ائوزیـنY به طور معمول در غلظت‌های 1 تا 5 درصد از نظر حجم، در آب یا اتانول حل می‌شود. برای جلوگیری از رشد قالب در محلول‌های آبی، گاهی اوقات تیمول اضافه می‌شود. غلظت کمی (0/5 درصد) از اسید استیک معمولاً لکه‌ای قرمز عمیق‌تر به بافت می‌دهد. ائوزیـن به عنوان یک سرطان‌زا کلاس 3 در IARC ذکر شده است.
سایر استفاده‌های ائوزین:
از این ماده نیز به عنوان یک رنگ قرمز در جوهرها استفاده می‌شود. با گذشت زمان ائوزیـن تمایل به تخریب دارد و اتم‌های برم خود را از دست می‌دهد، از این رو باعث می‌شود که رنگ با ترکیب چنین رنگی، به یک رنگ قهوه‌ای تیره‌تر برسد. یکی از کاربران قابل توجه رنگ ائوزیـن، نقاش بعد از امپرسیونیست، ون گوگ بود.
شناسایی سلول‌ها و ساختارهای پوستی در رنگ آمیزی هماتوکسیلین و ائوزین (H&E)
رنگ‌های H&E دارای توانایی شگفت انگیزی برای لکه گیری هر سلول و ساختار در بافت و تمایز هر یک از اجزا هستند. پوست پستانداران با این خصوصیات متمایز از سایر نمونه‌های بافت لکه دار (مانند بافت روده‌ای یا عصبی) برجسته است:
- لایه کراتین (در صورت رنگ آمیزی صحیح ورق‌های صورتی عمیق سلولهای مسطح فاقد هسته)
- پاپیلاهای پوستی (لایه پوستی که به لایه اپیدرم گسترش می‌یابد و به صورت پیش بینی‌های انگشت مانند ظاهر می‌شود)
- فولیکول‌های مو (همه پوست حاوی مو نیست، مانند دست و پا)
- رنگدانه ملانین (اگرچه این رنگدانه قهوه‌ای در عنبیه و قسمت‌های سیستم عصبی نیز یافت می‌شود)
هماتوکسیلین هسته‌های سلولی را آبی رنگ می‌کند، در حالی که ائوزین سلولهای غیر هسته‌ای را رنگ می‌کند و ساختار آن‌ها را صورتی / نارنجی مانند سیتوپلاسم و کلاژن می‌کند. این رنگ‌ها به صورت ترکیبی در شناسایی سلول‌ها و لایه‌های زیر کمک می‌کنند:
1-لایه اپیدرمال از سلولهای زیر تشکیل شده است که پنج زیر لایه را تشکیل می‌دهد:
سلولهای پایه یا لایه جوانه‌ای: سلول‌ها روی درم قرار می‌گیرند. هسته‌های آبی قابل مشاهده هستند و اینجاست که میتوز اتفاق می‌افتد و سلول‌ها تقسیم می‌شوند.
سلول خاردار یا لایه سلول خاردار: سلول‌ها توسط خارها به هم متصل می‌شوند و هسته‌های آبی قابل مشاهده هستند.
لایه سلول دانه ای: سلول ها هسته خود را از دست می‌دهند و گرانول‌های بنفش مشهود است.
لایه شفاف: هسته یا گرانول سلول دیگر مشهود نیست و یک لایه صورتی روشن ایجاد می‌کند.
لایه کراتین: از سلولهای سنگفرشی صورتی عمیق تشکیل شده است که فاقد هسته هستند و شروع به ریزش می‌کنند.
2-لایه پوستی از سلول‌ها و ساختارهای زیر تشکیل شده است:
پاپیلاهای پوستی: پیش بینی‌های انگشتی از بافت پیوندی که به لایه اپیدرم می‌رسند.
مو: از لایه پوستی شروع می‌شود و به سطح پوست گسترش می‌یابد (مشخص شده به عنوان A در تصویر پایین).
غدد روغنی (سبوم): در نزدیکی ساقه مو یافت می‌شود (در تصویر پایین B مشخص می‌شود).
غدد عرق: ساختارهای پیچ خورده و لوله‌ای که عرق تولید می‌کنند (در تصویر پایین با نام C شناخته می‌شود).
3-لایه زیر جلدی (چربی) شامل:
سلولهای چربی: بدن را عایق بندی و کوسن می‌کنند.
کلاژن و الیاف الاستیک: اجازه انعطاف پذیری و تاب آوری پوست را می‌دهد.
رگ‌های خونی: مواد مغذی و اکسیژن را از طریق خون به داخل پوست منتقل می‌کنند.
عصب‌ها: تجربه حسی در پوست را مجاز کنید.
خرید ائوزین
خرید ائوزین از این شرکت با درصد خلوص 99.9% در بسته‌بندی درام‌های ۲۵ کیلوگرمی انجام می گیرد.
قیمت پودر ائوزین
پیشگامان شیمی یک واردکننده، تامین کننده و عمده فروش مواد اولیه صنعتی در ایران است. شما می توانید قیمت ائوزین را از طریق تماس با ما یا ارسال درخواست به ایمیل : info@irchem.ir یا درج پیغام در سایت irchem دریافت کنید. اطمینان داشته باشید که می توانید خرید مواد اولیه صنعتی را با قیمت خوب از این مجموعه داشته باشید.
